Spencer Locke lahir pada tahun 1991 di Winter Park, Florida. Sejak kecil, ia menunjukkan minat besar terhadap seni dan akting, bahkan saat usia 6 tahun sudah menggambar dirinya di atas panggung dengan bintang di atas kepala. Pada usia 8 tahun, ia mulai mengikuti kelas akting dan langsung mendapatkan banyak iklan televisi di area Orlando.

Pada usia 11 tahun, Spencer dan keluarganya pindah ke Los Angeles untuk mengejar impian mereka. Dalam waktu kurang dari setahun, ia memperoleh peran tamu di Without a Trace dan berperan dalam film Spanglish. Ia kemudian menjadi pemeran tetap sebagai Bitsy di acara Nickelodeon Ned's Declassified School Survival Guide.

Pada 2004, Spencer mendapatkan peran utama sebagai Jenny di film Monster House, yang merupakan salah satu film pertama menggunakan teknologi Motion Capture. Ia dinominasikan untuk Penghargaan Annie untuk perannya tersebut. Pada usia 14 tahun, ia memerankan K-Mart di Resident Evil: Extinction dan kembali di Resident Evil: Afterlife, yang dirilis tahun 2010.

Selain film, Spencer tampil di berbagai acara televisi seperti Cougar Town, In Plain Sight, The Vampire Diaries, Cold Case, dan Love Bites. Ia juga membintangi film independen dan mini-series Twentysixmiles yang sedang mencari distribusi. Saat ini, Spencer tinggal di Los Angeles bersama keluarganya dan menatap masa depan cerah.