René Murat Auberjonois lahir pada 1 Juni 1940 di New York City dari keluarga seni, termasuk kakek seorang pelukis Swiss dan ayah seorang penulis dan koresponden asing saat Perang Dingin. Setelah keluarganya pindah ke Paris pasca Perang Dunia II, René menunjukkan bakatnya sejak kecil, terutama saat memimpin pertunjukan musikal di sekolah saat usia enam tahun, yang menegaskan keinginannya menjadi aktor.

Setelah kembali ke Amerika, keluarga René menetap di sebuah Koloni Artis di New York bagian utara. Di sana, ia dikelilingi oleh musisi dan aktor terkenal seperti Helen Hayes dan Burgess Meredith, yang kemudian menjadi mentor penting bagi perjalanan kariernya. Penampilan pertamanya di teater diperoleh saat berusia 16 tahun sebagai magang di sebuah teater di Stratford, Connecticut, berkat bantuan John Houseman.

René menempuh studi teater di Carnegie-Mellon University dengan penuh minat pada proses pembuatan pertunjukan secara lengkap. Setelah lulus, ia bergabung dengan berbagai perusahaan teater terkenal seperti American Conservatory Theater dan Mark Taper Forum. Pada tahun 1969, ia mendapatkan peran di musikal Broadway berjudul Coco bersama Katharine Hepburn, yang membawanya meraih penghargaan Tony.

Sepanjang kariernya, René membintangi banyak pertunjukan teater, film, dan televisi. Ia dikenal lewat peran Clayton Endicott III di serial komedi Benson dan sebagai Odo di Star Trek: Deep Space Nine selama tujuh tahun. Selain itu, ia melakukan pembacaan buku sebagai pengisi suara dan tampil di berbagai film seperti The Patriot dan serial seperti Frasier serta The Practice. Keberhasilannya membuktikan bakat multidimensinya di dunia hiburan.