Mark Ruffalo lahir pada tanggal 22 November 1967 di Kenosha, Wisconsin. Ia berasal dari keluarga sederhana dengan ayah berdarah Italia dan ibu berdarah Perancis-Kanada dan Italia. Pindah ke Virginia Beach, Mark menghabiskan masa remaja di sana sebelum pindah ke San Diego dan akhirnya menetap di Los Angeles.

Awal kariernya bermula dari kelas di Stella Adler Conservatory dan mendirikan Orpheus Theatre Company, di mana ia belajar berbagai peran di teater mulai dari aktor, penulis, sutradara hingga produser.

Perjalanan ke layar lebar dimulai dari peran kecil di film horor Mirror Mirror 2 (1994) dan film seri berikutnya. Ia menjalani berbagai peran kecil di film seperti The Dentist dan A Fish in the Bathtub di tahun 1996-1998.

Kesempatan besar datang saat berkolaborasi dengan penulis naskah Kenneth Lonergan, yang membawanya meraih kesuksesan di panggung dan film seperti You Can Count on Me (2000), yang mendapatkan pujian dan perbandingan dengan Marlon Brando.

Hingga tahun 2002, Ruffalo menjalani berbagai peran di film beragam dari drama, thriller, hingga komedi. Ia sempat didiagnosis mengidap acoustic neuroma, tumor otak jinak yang menyebabkan paralisis parsial wajah, tetapi ia pulih sepenuhnya.

Di tahun 2003, ia tampil sebagai detektif di In the Cut dan sebagai kekasih Gwyneth Paltrow di View from the Top, meski filmnya gagal di box office. Tahun 2004 menjadi tahun penting dengan film seperti Eternal Sunshine of the Spotless Mind dan Collateral yang memperkuat reputasinya sebagai aktor serba bisa.

Seiring waktu, Ruffalo terus aktif di film dan panggung, membintangi film populer dan independen, serta debut di Broadway. Di tahun 2010, ia meraih double breakthrough: menyutradarai film indie Sympathy for Delicious dan bermain di The Kids Are All Right, yang membuatnya mendapatkan nominasi Oscar dan penghargaan lainnya.

Pada 2014 dan 2015, ia mendapatkan nominasi Academy dan SAG Awards sebagai pendukung di film Foxcatcher dan Spotlight. Pada 2012, ia memulai peran ikonik sebagai Dr. Bruce Banner / Hulk di Marvel Cinematic Universe, yang membuat namanya melambung secara global. Ia kembali memerankan karakter ini dalam banyak film Marvel dan menjadi bagian penting dari dunia superhero tersebut.

Selain karier di film, Ruffalo aktif di panggung dan berbagai proyek film termasuk film drama dan komedi. Ia menikah dengan Sunrise Coigney sejak tahun 2000 dan memiliki tiga anak. Kariernya yang penuh dedikasi dan keberhasilan di berbagai bidang menjadikan Mark Ruffalo salah satu aktor terkemuka saat ini.