Eric Mabius lahir di Pennsylvania sebagai anak kedua dari Elizabeth (née Dziczek) dan Craig Mabius. Ayahnya berdarah Austria dan Irlandia, sementara ibunya keturunan penuh Polandia. Ia menghabiskan masa kecilnya di Massachusetts dan kemudian melanjutkan pendidikan di Sarah Lawrence College, sebuah sekolah seni terkenal. Di sana, ia mendalami akting, menulis, dan teori film, yang menjadi batu loncatan untuk kariernya di dunia teater dan film kecil Off-Broadway.

Debut film pertamanya adalah Welcome to the Dollhouse (1995), di mana ia memerankan seorang remaja yang dikagumi Heather Matarazzo, seorang bintang rock remaja. Sejak itu, Eric tampil dalam lebih dari 27 film, termasuk tujuh yang diputar di Sundance, serta lebih dari selusin proyek televisi. Ia dikenal karena perannya sebagai pemimpin geng sekolah dalam Black Circle Boys (1997).

Kemampuannya dalam berperan beragam membuatnya tidak terjebak dalam tipe karakter tertentu. Ia mendapatkan perhatian luas melalui film box office Cruel Intentions (1999), sebagai atlet sekolah yang diancam. Ia juga membintangi The Crow: Salvation (2000), dan film horor fiksi ilmiah Resident Evil (2002), memerankan seorang polisi di masa depan.

Pada 2004, Eric sukses mendapat perhatian dari penonton melalui serial drama The L Word. Ia juga membintangi serial teknologi tinggi Eyes (2005), yang meski diterima baik, tidak berhasil mendapatkan banyak penonton. Ia tetap memiliki basis penggemar setia, terutama dari penonton film independen.

Pada 2006, namanya semakin dikenal lewat perannya sebagai seorang eksekutif wanita yang suka berselingkuh dalam serial sukses Ugly Betty. Meski begitu, Eric dikenal pribadi yang tertutup dan tidak suka mencari sorotan media, sehingga jarang tampil di acara yang mengundang perhatian paparazzi.

Pada Februari 2006, ia menikah dengan kekasihnya selama lima tahun, interior desainer Ivy Sherman, di New Orleans. Ia tetap fokus menjalani karier dan kehidupannya yang pribadi dan penuh privasi.