Akshaye Khanna lahir di Mumbai pada tahun 1975 sebagai putra dari aktor dan politikus Vinod Khanna. Ia menempuh pendidikan di Kishore Namit Kapoor Acting Institute di Mumbai sebelum memulai debut filmnya pada tahun 1997 dengan Himalay Putra. Meski film ini tidak sukses secara komersial, penampilannya di Border mendapatkan penghargaan Filmfare Best Debut Award dan nominasi untuk Best Supporting Actor.

Setelah itu, ia membintangi beberapa film yang kurang sukses seperti Mohabbat, Kudrat, dan Laawaris. Pada tahun 1999, Akshaye tampil di film Rishi Kapoor, Aa Ab Laut Chalen, yang mendapat respons biasa saja, namun ia dipuji atas aktingnya. Film Taal yang dirilis tahun 1999 menjadi sukses kritis dan komersial, menandai tonggak karirnya. Pada tahun 2001, perannya di Dil Chahta Hai menjadi titik balik yang penting, film ini sukses besar dan mengantarkannya penghargaan Filmfare Award pertama sebagai Supporting Actor dan meluncurkan karirnya bersama Saif Ali Khan.

Selanjutnya, ia membintangi Humraaz dan film komedi Hungama serta Hulchul, yang sukses di box office. Meskipun beberapa film berikutnya seperti Shaadi Se Pehle dan Naqaab kurang berprestasi, Akshaye tetap mendapatkan pujian untuk perannya di Gandhi, My Father sebagai Harilal Gandhi, yang dianggap sebagai penampilan terbaiknya. Pada 2008, film Race sukses besar dan membuatnya menerima penghargaan sebagai Villain terbaik. Hingga 2010, ia tetap aktif bermain film dan mendapat apresiasi kritis, meskipun beberapa film berikutnya tidak tampil bagus di box office.